ICS 65.020.30 B 44 中国实验动物学会团体标准 实验动物

T/CALAS 110-2021 人源肿瘤异种移植小鼠






模型制备技术规范
Laboratory animal —Specification of patient-deri ved xenograft mouse models 2022-01-10 发布 中国实验动物学会 2022-01-10 实施 发布 全国团体标准信息平台 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草 规则》的规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中国实验动物学会归口。 本文件由全国实验动物标准化技术委员会（ SAC/TC281 ）技术审查。 本文件由中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会提出并组织起草。 本文件起草单位：西安交通大学、空军军医大学、南昌大学。 本文件主要起草人：刘恩岐、薛莹、师长宏、何远桥、王维蓉、张海、赵四海、白亮。 全国团体标准信息平台 实验动物 人源肿瘤异种移植小鼠模型 制备技术规范 1 范 围 本文件规定了利用小鼠建立人源肿瘤异种移植（ patient-derived xenograft ，PDX ）模型 基本原则， 包括动物选择、 模型制备和评价方法等， 规定了 PDX 模型信息化管理基本原则， 包括临床标本选择与处理、模型质量控制、应用研究和信息化管理等。 本文件适用于 PDX 模型制备、质量管控和模型应用，反映了 PDX 模型建立、验证和 使用过程。 2 规范性引用文件 下列文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版 本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB14922.1 《实验动物 寄生虫等级与监测》 GB14922.2 《实验动物 微生物等级与监测》 GB 14925 《实验动物 环境及设施》 GB/T 14926.55 《实验动物 免疫酶组织化学法》 GB 19489 《实验室 生物安全通用要求》 GB/T 35823 《实验动物 动物实验通用要求》 GB/T 35892 《实验动物 福利伦理审查指南》 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 人源肿瘤异种移植 PDX 将患者的肿瘤组织或细胞移植到免疫缺陷动物 （一般指小鼠） 体内形成的移植瘤模型。 3.2 传代 passage 肿瘤在动物体内生长到一定程度后，从其体内取出肿瘤组织并移植到新的免疫缺陷动 物体内的过程，称为 PDX 模型的传代。 全国团体标准信息平台 中国实验动物学会团体标准汇编及实施指南（第六卷）
106 3.3 实体瘤 solid tumor 临床影像检查（如 X线、 CT、B超等）或触诊扪及的有形肿瘤组织。 3.4 非实体瘤 non-solid tumor 临床影像检查 （如 X线、 CT、B超等） 以及触诊无法看到或扪及的肿瘤。例如，白血 病属于非实体瘤。 3.5 荷瘤小鼠 tumor-bearing mice 被移植了肿瘤组织或细胞的小鼠，在 PDX 模型中指移植肿瘤患者来源肿瘤组织或细胞 的免疫缺陷小鼠。 3.6 免疫缺陷动物 immunodeficiency animal 由先天性遗传突变或用人工方法造成一种或多种免疫系统组成成分缺失的动物。 3.7 裸小鼠 nude mouse 由于 Foxn1 基因发生突变而形成，无毛、缺乏正常胸腺， T淋巴细胞生成障碍，应用 广泛。 3.8 SCID 小鼠 由于常染色体 Prkdc 基因隐性突变而形成，表现为严重的联合免疫缺陷（ severe combined immunodeficiency ，SCID ）症状， B淋巴细胞和 T淋巴细胞功能缺失。 3.9 NOD-SCID 小鼠 将Prkdc 突变基因导入非肥胖糖尿病背景小鼠（ non-obesity diabetes ，NOD ）体内获 得。 Prkdc 突变基因影响 T淋巴细胞、 B淋巴细胞的正常发育， NOD-SCID 小鼠除了 T淋 巴细胞、 B淋巴细胞功能缺陷， NK细胞功能和补体结合能力也下降。 3.10 重度联合免疫缺陷小鼠 是在 NOD-SCID 背景下， IL-2 受体γ链（IL2rγ） 缺失而形成的重度联合免疫功能缺陷 全国团体标准信息平台 107 实验动物 人源肿瘤异种移植小鼠模 型制备技术规范 小鼠，此小鼠缺乏成熟的 T淋巴细胞、 B淋巴细胞和 NK细胞，巨噬细胞功能降低，是异 种移植模型的良好宿主动物。 常见重度联合免疫缺陷小鼠品系有： NOG （NOD. Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Sug/JicCrl ） NSG （NOD. Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ） NCG （NOD/ShiLtJGpt- Prkdcem26Cd52Il2rgem26Cd22/Gpt） B-NDG （NOD- Prkdcscid IL2rgtm1/Bcgen ） NPG （NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Vst/Vst ） M-NSG （NOD -Prkdcscid Il2rgem1/Smoc ）等 4 生物安全风险评估 实施 PDX 实验前，按照 GB 19489 要求，评估其生物安全危害。实验操作应在生物安 全二级或以上级别生物安全实验室或相应级别生物安全柜中开展。对于肿瘤患者基础患病 信息，需要进行风险评估，确定其生物安全危害及开展实验的环境要求。 5 动物模型选择 5.1 选择原则 PDX 模型选择 SPF 级免疫缺陷动物进行移植。 可根据购买成本、 饲养环境和科学研究 需求，选择不同品系小鼠移植。 5.2 常用于建立 PDX 模型免疫缺陷小鼠品系 常用于建立 PDX 模型的免疫缺陷小鼠品系有裸小鼠、 SCID 小鼠、 NOD-SCID 小鼠以 及重度联合免疫缺陷小鼠等。 5.3 用于建立 PDX 模型的小鼠的年龄、性别 多选择 4～12周龄、雌性小鼠。若某种肿瘤与性别强相关，则多依照肿瘤的种类选择 小鼠性别，如乳腺癌一般选择雌性小鼠，前列腺癌一般选择雄性小鼠。 5.4 模型小鼠饲养环境 PDX 模型小鼠均使用 SPF 级免疫缺陷动物，即在屏障环境中用独立通气笼具 （individual ventilation cage ，IVC）装置或隔离器内饲养。饮用高压灭菌水或酸化水，使用 Co60或电子束照射后的饲料。进入屏障环境的材料均通过高压灭菌或物理化学方法进行辐 射、消毒。定期开展饲养环境监测，确保免疫缺陷动物身体健康。 6 肿瘤样本选择与前处理 6.1 患者肿瘤样本选择 在符合医学伦理学规范和《中华人民共和国人类遗传资源管理条例》前提下，根据科 全国团体标准信息平台 中国实验动物学会团体标准汇编及实施指南（第六卷）
108 学研究需要、肿瘤分型、肿瘤特征、实验条件、外科手术或活检取材方式等进行选择。 6.2 肿瘤样本前处理 肿瘤组织标本离体后采用 2℃～8℃预冷生理盐水冲洗，去除脂肪、结缔组织和坏死部 分，经病理医生确认后，选择肿瘤活性最好的部分放入预冷样本运输保存液的无菌样本采 集管，封口后在管壁标记好患者信息，将采集管放入冰包中低温条件下（ 2℃～8℃，不能 结冰）转移至实验室。在生物安全二级或以上级别生物安全实验室或相应级别生物安全柜 中，按照无菌操作流程，将肿瘤组织剪或切成直径 1 mm～3 mm 大小的微组织块，整个操 作过程中，使样本保持低温。 6.3 肿瘤样本保存 在PDX 模型制备整个过程中， 对肿瘤患者和每一代小鼠模型的肿瘤组织样本均需进行 适当保存，以备鉴定和药物评价。 6.3.1 病理保存 将肿瘤组织块放入装有组织固定液的病理管常温保存， 并标记样本信息。 在 30天内对 固定的组织进行脱水包埋处理。 6.3.2 样本冻存 将肿瘤组织块修剪后，放入含有冻存液的无菌冻存管内，采用冻存体系或程序降温盒 冻存。 冻存体系： 4℃、 15 min→0℃、 30 min～2 h→80℃过夜，液氮长期保存。 7 PDX 模型制作 7.1 模型制作环境和生物安全防护 操作人员应在生物安全二级或以上级别生物安全实验室或相应级别生物安全柜中进行 接种、 传代实验， 实验过程中始终保持无菌操作。 操作人员应穿着无菌工作服， 佩戴手套、 口罩， 对血液、 体液类肿瘤应佩戴护目镜。 对于肿瘤患者基础患病的情况， 根据风险评估，操作人员进行相对应级别的更严格的防护。 7.2 皮下接种 麻醉小鼠，接种部位备皮，用乙醇和碘伏消毒。将移植肿瘤组织块放入套管针中，一 般接种在皮下血供丰富的双侧肩胛区。将接种后的小鼠置于温暖环境清醒后正常饲养。注 意需将手术后的小鼠