T/GZTPA 团体标准 T/GZTPA0004-2019 茶叶中多种农药残留测定液相色谱法 Determinationofpesticideresiduesinteabyliquidchromatography 2019-12-26发布 2020-01-01实施 贵州省绿茶品牌发展促进会发布 全国团体标准信息平台 T/GZTPA0004-2019 I目次 前言.................................................................................II 1范围................................................................................1 2规范性引用文件......................................................................1 3原理................................................................................1 4试剂和材料..........................................................................1 5仪器与设备..........................................................................2 6分析步骤............................................................................2 7平行试验及空白试验..................................................................3 8结果计算.............................................................................3 9精密度...............................................................................4 全国团体标准信息平台 T/GZTPA0004-2019 II前  言 本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由贵州省农产品质量安全监督检验测试中心提出。 本标准由贵州省绿茶品牌发展促进会归口。 本标准起草单位：贵州省农产品质量安全监督检验测试中心、贵州大学。 本标准主要起草人：庞宏宇罗华兰蔡滔王艺蓉王晓鹭卢平王震杜楠周雪丽丁静 全国团体标准信息平台 T/GZTPA0004-2019 1茶叶中多种农药残留测定液相色谱法 1范围 本标准规定了同时测定茶叶中吡虫啉、啶虫脒、多菌灵、除虫脲、灭幼脲、辛硫磷和阿维菌素多种 农药残留的检测方法。 本标准适用于我省县级农产品质量安全检测站开展茶叶生产基地茶叶中农药残留例行监测和风险 评估时使用。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规则和试验方法 GB/T8302茶取样 3原理 茶叶样品经水浸泡后乙腈高速匀浆提取，盐析离心，氨基固相萃取小柱净化，用乙腈+甲苯（3：1） 洗脱农药，用液相色谱测定，以保留时间定性，外标法定量。 4试剂和材料 4.1乙腈：色谱纯 4.2甲苯：色谱纯 4.3氯化钠：分析纯 4.4提取液：乙腈 4.5淋洗液：乙腈+甲苯=3:1（V:V） 4.6氨基固相萃取小柱：6mL/500mg或相当 4.7滤膜:0.20μm，有机相滤膜 4.8农药标准溶液:具有有效性证书 4.9标准溶液配制 4.9.1单一组分标准溶液： 用移液管准确量1000μg/mL各标准品1.00mL，用甲醇定容10mL，配制成100.0μg/mL标准储备液， 0~4℃冷藏避光保存。 4.9.2混合标准储备液： 全国团体标准信息平台 T/GZTPA0004-2019 2将配置好的单一组分标准溶液（4.10.1）用甲醇作为溶剂配置成10.0μg/mL混合标准储备液， 0~4℃冷藏避光保存。 4.9.3混合标准工作液 用15%甲醇水溶液作为溶剂将混合标准储备液稀释成0.1μg/ml的混合标准工作溶液，临用现配。 5仪器与设备 5.1液相色谱仪：配有可变波长紫外检测器 5.2旋转蒸发仪 5.3匀浆机：转速不低于10000r/min 5.4离心机：转速不低于4000r/min 5.5天平：百分之一 6分析步骤 6.1试样的制备 按GB/T8302抽取茶叶样品，将样品粉碎，混匀，缩分，密封，作为试样。试样于4℃冷藏保存， 备用。 6.2提取 称取5g试样（精确至0.01g）,于50mL离心管中，加入10mL纯水浸泡20分钟加入20.0mL乙腈，在 匀浆机中高速匀浆2min,加入4g氯化钠，盖上盖子剧烈震荡1min,将离心管放入离心机中以4000r/min 离心5min，取10mL上清液于梨形瓶中，45℃旋转蒸发至1mL左右，待净化。 6.3净化 用5mL淋洗液（4.6）预淋洗氨基固相萃取小柱，弃去流出液。下接梨形瓶，将6.2中待净化的浓 缩液转移至氨基固相萃取柱中，用2mL淋洗溶液洗涤梨形瓶；并将洗涤液移入萃取柱中，重复三次，再 用25mL淋洗液淋洗小柱，收集上述所有流出液于梨形瓶中，45℃水浴旋转蒸发至近干，用甲醇水溶液 （15：85）定容1mL，用液相色谱仪测定。 6.4测定 6.4.1仪器条件 a)色谱柱：C18柱，4.6mm5µm25cm； b)流动相、梯度洗脱及波长条件见表1，表2 全国团体标准信息平台 T/GZTPA0004-2019 3表1洗脱梯度 时间 min水 %甲醇/乙腈（7+3） % 0.00 85 15 20.00 0 100 23.00 0 100 23.01 85 15 30.00 85 15 表2波长条件设置 时间/min 0 6.00 12.30 13.10 18.00 29.00 波长/nm 254 270 247 286 245 254 c)柱温：40℃； d)流速：1.0mL/min； e)进样量：10μL； 6.4.2液相色谱检测及确证 在相同的条件下进行样品测定，以保留时间定性。以样品溶液峰面积与标准溶液峰面积比较定量（定 量时标准溶液的峰面积与样品峰面积在3倍范围内）。色谱图参见附录B。 7结果计算 试样中被测农药残留量以质量分数计，单位以毫克每千克（mg/kg）表示，按公式（1）计算。 =V1×A×V3×Cs m×V2×As（1） 式中： —试样中被测物残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）； Cs—基质标准工作溶液中农药的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； A—试样溶液中被测物的色谱峰面积； 全国团体标准信息平台 T/GZTPA0004-2019 4As—基质标准工作溶液中被测物的色谱峰面积； V1—提取溶剂总体积，单位为毫升（mL）； V2—吸取出用于检测的提取液的体积，单位为毫升（mL）； V3—试样最终定容体积，单位为毫升（mL）； m—试样溶液所代表试样的质量，单位为克（g）。 计算结果保留两位有效数字。 8精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。 全国团体标准信息平台 T/GZTPA0004-2019 5附录A （参考性附录） 农药检测检出限参考数据 吡虫啉、啶虫脒、多菌灵、除虫脲、灭幼脲、辛硫磷和阿维菌素检出限参考数据 序号 中文名 英文名 保留时间 min检出限 mg/kg 1 吡虫啉 Imidacloprid 11.887 0.03 2 啶虫脒 Acetamiprud 12.021 0.03 3 多菌灵 Carbendazim 13.518 0.05 4 除虫脲 Diflubenzuron 21.265 0.03 5 灭幼脲 Chlorbenzuron 21.724 0.04 6 辛硫磷 Phoxim 22.342 0.05 7 阿维菌素 Avermectins 25.421 0.05 全国团体标准信息平台 T/GZTPA0004-2019 6附录B (资料性附录) 液相标准溶液色谱图 图1吡虫啉、啶虫脒、多菌灵、除虫脲、灭幼脲、辛硫磷 和阿维菌素标准溶液色谱图 全国团体标准信息平台