ICS07.100 CCSB15/19 WSWXH 新疆维吾尔自治区微生物学会团体标准 T/WSWXH002—2022 新疆主要果树和防护林腐烂病菌检测 技术规程 RegulationforrapiddetectionofValsacankerofthefruittreeandtheshelterforest ofXinjiang 2022-09-04发布 2022-09-06实施 新疆维吾尔自治区微生物学会  发布 全国团体标准信息平台 T/WSWXH002—2022 I目次 前言..................................................................................II 1范围................................................................................1 2规范性引用文件......................................................................1 3术语和定义..........................................................................1 PCR检测技术polymerasechainreaction..............................................1 ITS序列ITSsequences............................................................1 序列特异性引物sequencespecificprimer..............................................1 分生孢子器pycnidium............................................................1 分生孢子conidium（复数conidia）..................................................1 4方法原理............................................................................1 分类地位........................................................................2 鉴定依据........................................................................2 5主要设备及实验用具..................................................................2 设备............................................................................2 实验用具........................................................................2 6试验材料............................................................................2 培养基..........................................................................2 试剂............................................................................2 7病害症状............................................................................2 8实验室检测..........................................................................2 取样方法........................................................................2 显微观察........................................................................2 保湿培养........................................................................3 病原菌的分离和纯化..............................................................3 病原菌形态鉴定..................................................................3 致病性测定......................................................................3 分子生物学检测及鉴定............................................................3 9结果判定............................................................................3 附录A（资料性）培养基................................................................4 附录B（资料性）果树腐烂病形态特征....................................................5 附录C（资料性）苹果树腐烂病致病性测定方法及步骤......................................6 附录D（资料性）属专化型PCR检测方法..................................................7 附录E（资料性）种特异性PCR检测方法.................................................8 全国团体标准信息平台 T/WSWXH002—2022 II前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由新疆农业科学院微生物应用研究所提出。 本文件由新疆维吾尔自治区微生物学会归口。 本文件起草单位：新疆农业科学院微生物应用研究所，石河子大学农学院，阿克苏地区食品安全检 测中心，阿克苏地区林业技术推广服务中心 本文件主要起草人：宋素琴、赵思峰、高雁、楚敏、张志东、谭慧林、冶海林、曹焕、顾美英、张 煜、张振军、刘倩倩 全国团体标准信息平台 T/WSWXH002—2022 1新疆主要果树和防护林腐烂病菌检测 技术规程 1范围 本文件规定了苹果、梨树、海棠等新疆果树和胡杨、新疆杨、沙枣、毛白杨、刺槐等防护林木腐烂 病菌分离鉴定的方法。 本文件适用于苹果、梨树、海棠、胡杨、新疆杨、沙枣、毛白杨、刺槐腐烂病菌的检测和鉴定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T38488微生物快速测定方法 SN/T3069苹果和梨果实球壳孢腐烂病菌检疫鉴定方法 GB/T29589香菜腐烂病菌检疫鉴定方法 SN/T1157进出境植物苗木检疫规程 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 PCR检测技术polymerasechainreaction 以DNA为模板，在DNA聚合酶、引物和核苷酸底物（dNTP）共同参与下，通过设置温度的变化， 实现模板变性、退火和延伸的多次循环过程，实现指数级扩增目标基因，达到检测判断的技术。 ITS序列ITSsequences 位于18S核糖体DNA（rDNA）和28SrDNA中间被5.8SrDNA分为两部分的间隔序列称为ITS序列 （Internaltranscribedspacer），有极大的保守性，即存在着广泛的异种同源性，其长度和序列变 化较大，将其扩增物进行RFLP或序列分析，可用于对真菌的不同生物型、菌株的属、种进行分类鉴定。 序列特异性引物sequencespecificprimer 根据等位基因的核苷酸序列，设计的等位基因特异性的或组特异性的引物，即为序列特异性引物 (sequencespecificprimer，SSP)。SSP只能与某一等位基因特异性片段的碱基序列互补性结合，可通 过PCR特异性地扩增该基因片段，从而达到分析基因多态性的目的。 分生孢子器pycnidium 是真菌主要载孢体，由拟薄壁组织形成的球形或烧瓶形的结构，内部着生分生孢子梗。其类型多样， 可以是完全封闭，或有一个孔口，或有一个伸向孔口的长脖颈，可以表