T/GZTPA 贵州省绿茶品牌发展促进会团体标准 T/GZTPA0011-2021 贵州茶叶中脂肪酸的测定 气相色谱质谱法 DeterminationoffattyacidinGuizhoutea Gaschromatographymassspectrometermethod 2021-11-25发布 2021-11-26实施 贵州省绿茶品牌发展促进会发布 全国团体标准信息平台 T/GZTPA0011-2021 I 前言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由贵州省农产品质量安全监督检验测试中心提出。 本文件由贵州省绿茶品牌发展促进会提出并归口。 本文件起草单位：贵州省农产品质量安全监督检验测试中心、广东省科学院测试分析研究所（中 国广州分析测试中心）、贵州省绿茶品牌发展促进会。 本文件主要起草人：李俊、蔡滔、向章敏、陈啸天、王震、张兴伦、赖飞、刘凯、徐嘉民、方舒 婷、祝愿、丁静、王志、杜楠、熊胜利、周雪丽、王艺蓉、刘佳、王晓鹭、苏美丞。 全国团体标准信息平台 T/GZTPA0011-2021 1 贵州茶叶中脂肪酸的测定气相色谱质谱法 1范围 本文件规定了贵州茶叶中游离态脂肪酸含量的测定方法。 本文件适用于贵州茶叶中游离脂肪酸的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用 于本文件。 GB5009.3食品安全国家标准食品中水分的测定 GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性 与再现性的基本方法 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 NY/T2102茶叶抽样技术规范 3术语与定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4原理 以己二酸为内标物质，10%（体积分数）硫酸-甲醇溶液在常温（25℃左右）条件下对茶叶中的游 离态脂肪酸进行甲酯化反应，使用二氯甲烷萃取甲酯化产物，采用气相色谱-质谱检测器测定萃取液中 游离脂肪酸含量。 5试剂或材料 除非另有规定,仅使用分析纯试剂。 5.1水，GB/T6682，一级； 5.2脂肪酸甲酯标准品，含量≥97%（质量分数）或混合脂肪酸甲酯标准溶液； 5.3己二酸，含量≥97%（质量分数）； 5.4浓硫酸，含量≥95%（质量分数）； 5.5甲酯化溶液：10%（体积分数）硫酸-甲醇溶液； 5.6甲醇，色谱级试剂； 5.7二氯甲烷，色谱级试剂。 6仪器设备 6.1气相色谱-质谱联用仪，EI源； 6.2分析天平：感量0.1mg； 6.3离心机：≥4500r/min； 全国团体标准信息平台 T/GZTPA0011-2021 2 6.4漩涡震荡器：可变调速。 7样品制备与保存 7.1制样 茶叶样品按照NY/T2102进行采样和分样后，取样品约200g，经粉碎机粉碎，过60目筛，制成茶叶 粉末，一式两份。 7.2保存 试样密封避光保存于4℃冰箱，待用。 8分析步骤 8.1标样溶液的制备 8.1.1混合脂肪酸甲酯标准溶液:取出适量脂肪酸甲酯混合标准移至到10mL容量瓶中,用正庚烷稀释 定容﹐贮存于-10℃以下冰箱，有效期3个月。 8.1.2单个脂肪酸甲酯标准溶液：将单个脂肪酸甲酯分别从安培瓶中取出转移到10mL容量瓶中， 用正庚烷冲洗安培品，再用正庚烷定容，分别得到不同脂肪酸甲酯的单标溶液，贮存于-10℃以下冰箱， 有效期3个月。 8.1.3内标溶液：准确量己二酸（精确至0.0002g）用甲醇稀释定容，贮存于-10℃以下冰箱，有效期 6个月。 8.2样品制备处理 准确称取过40目筛的100mg茶末（精确至0.1mg）于50mL离心试管中，加入100μL己二酸内标标 准储备液和2.0mL10%（体积分数）硫酸-甲醇溶液（4.10），旋紧旋盖，涡旋振荡2min，常温（25℃左右） 放置过夜甲酯化反应24h±2h。反应后加入5.0mL去离子水，5.0mL二氯甲烷，旋紧旋盖，涡旋振荡3min 后3000rpm离心5min，取下层有机相过0.22μm尼龙针式滤头后进行气相色谱质谱检测器测定。 8.3仪器分析条件 8.3.1色谱条件 a）色谱柱：（88％氰丙基）芳基聚硅氧烷固定相，规格为60m×250μm，0.25μm膜厚或等效柱； b）载气条件：流速1.0mL/min，不分流进样； c）进样口温度：250℃； d）柱温箱升温程序：初始为50℃，保持2min，以5℃/min升温至245℃，保10min； e）传输线温度：250℃； 8.3.2质谱条件 a）检测方式：质量SIM描模式，SIM条件见附录A; b）电离方式：电子轰击电离源; c）离子源温度：230℃; d）四级杆温度：150℃; e）电离电压：-70eV; f）溶剂延迟时间：4min； 全国团体标准信息平台 T/GZTPA0011-2021 3 8.4定性、定量 8.4.1保留时间定性 在相同的条件下进行样品测定，被测试样中目标色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间 相比较，相对误差应在±2.5%之内。 8.4.2质荷比定性 在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣 除背景后的样品质谱图中，目标化合物的质谱定量和定性离子均出现，而且同一检测批次，对同一化 合物，样品中目标化合物的定性离子和定量离子的相对丰度比与质量浓度相当的基质标准溶液相比， 其允许偏差不超过表1规定的范围，则可判断样品中存在目标物。 表1定性时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 >50% >20%至50% >10%至20% ≤10% 允许相对偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 8.4.3定量分析 内标标准曲线法定量。 8.5样品测定 将混合标准工作溶液和试样溶液依次注入气相色谱-质谱联用仪中，保留时间和定性离子定性，测 得定量离子峰面积，待测样液中目标峰响应值应在仪器检测的定量测定线性范围之内，超过线性范围 时应根据测定浓度进行适当倍数稀释后再进行分析。 8.6平行试验 按以上步骤对同一试样进行平行试验测定。 8.7空白试验 除不加试料外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。 9结果计算 样品中脂肪酸的含量R，按照式（1）计算： )1(10 )(3 w mbcaYR （1） 式中： R——样品中脂肪酸的含量，单位为毫克每克（mg/g）； Y——样品中脂肪酸与内标物质己二酸的峰面积比值； a——脂肪酸标准工作曲线的截距； b——脂肪酸标准工作曲线的斜率； c——加入样品中内标物质己二酸的质量，单位为微克（μg）； m——样品的质量，单位为克（g）； w——样品中的水分含量，（%）； 如果符合（10.2），取两次测量的算数平均值作为结果，结果保留3位有效数字。 全国团体标准信息平台 T/GZTPA0011-2021 4 10实验要求 10.1空白及平行样实验要求 每次实验均要求带入样品空白和样品平行样实验，每个平行进样一次即可，取平均值作为实验结 果。 10.2允许差 在重复条件下同一样品获得的测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 全国团体标准信息平台 T/GZTPA0011-2021 5 附录A （资料性） 18种脂肪酸甲酯信息 A.118种脂肪酸甲酯质谱条件及保留时间见表A.1 表A.118种脂肪酸甲酯质谱条件及保留时间 序号名称 缩写分子式 CAS号 RT(min)选择性离子 定量离子定性离子1定性离子2 1 十五烷酸甲酯 C15:0C16H32O27132-64-120.401 256 74 87 2 十七烷酸甲酯 C17:0C18H36O21731-92-623.506 284 143 74 3 十七烯酸甲酯 C17:1C18H34O21120-25-8 24.14 208 282 74 4 十八烷酸甲酯 C18:0C18H36O2112-61-8 24.792 298 255 74 5 十九烷酸甲酯 C19:0C20H40O21731-94-826.182 298 255 74 6 油酸甲酯 C18:1C19H36O2112-62-9 26.768 264 296 74 7 亚油酸甲酯 C18:2C19H34O2112-63-0 27.797 294 264 81 8 亚麻酸甲酯 C18:2TC19H34O2301-00-8 29.006 292 250 69 9二十一烯酸甲酯 C21:1C22H42O2 111-81-9 29.182 324 292 69 1010,13-二十一二烯 酸甲酯C21:2C22H40O2 30.121 322 291 69 11二十三烷酸甲酯 C23:0C24H48O22433-97-830.906 354 311 87 12顺-11,14,17-二十碳 三烯酸甲酯C20:3n 3C21H36O255682-88-731.192 320 264 67 13 芥酸甲酯 C22:1C23H44O21120-34-931.444 320 97 87 14二十四烷酸甲酯 C24:0C25H50O22442-49-131.987 382 143 87 15二十五烷酸甲酯 C25:0C26H52O255373-89-233.049 382 339 87 16二十五烯酸甲酯 C25:1C26H50O2 2733-88-233.568 366 26