ICS 67.160.10 X 62 TB 团 体 标 准 T/ NAIA 026 —2021 粮食加工品及其制品中的合成着色 剂的测定 碳酸氢钠辅助提取 -高效 液相色谱法 Determination of synthetic colorants in grain processed products by high performance liquid chromatography with sodium bicarbonate assisted extraction 2021 -01-15发布 2021 -01-31实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 全国团体标准信息平台 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 -2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规 则》的规定编写。 本标准由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本标准起草单位：宁夏回族自治区粮油产品质量检测中心、江苏安舜技术服务有限公 司、宁夏农林科学院枸杞工程技术研究所、宁夏农产品质量标准与检测技术研究所、宁夏 化学分析测试协会。 本标准主要起草人：张春娥、廖若宇、刘新保、孙悦、胡海祥、孙华、郭雨、袁海 静、王芳、高晖、梁瑞、赵静、张小飞。 本标准为首次发布。 全国团体标准信息平台 粮食加工品及其制品中的合成着色剂的测定 碳酸氢钠辅助 提取-高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了玉米渣、玉米片、黑米、颜色挂面、小米、玉米糁、发糕、彩色馒头、 糙米、燕麦（片） 、高粱米、黍米、紫米、玉米粉、小米粉、玉米自发粉、米粉及其制品、 方便面、饼干、驴打滚、发酵面制品、年糕、威化等食品中的合成着色剂的 碳酸氢钠辅助 提取-高效液相色谱 测定方法。 本文件适用于粮食加工品、方便食品、饼干、速冻食品、薯类和膨化食品、糕点、淀 粉及淀粉制品及其他食物中的合成着色剂的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本 适用于本文件，凡是不注日期的引用文 件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文 件。 GB 5009.35 《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》 GB/T 6682 《分析实验室用水规格和试验方法》 GB/T 27404 《实验室质量控制规范 食品理化检测》 3 术语和定义 3.1 粮食加工品 :包括小麦粉（通用小麦粉、专用小麦粉） ，大米（大米、糙米类产 品、特殊大米、其他） ，挂面（普通挂面、花色挂面、手工面） ，其他粮食加工品（谷物加 工品、谷物碾磨加工品、谷物粉类制成品） 。 3.2 方便食品：包括方便面（油炸方便面、热风干燥方便面、其他方便面） ，其他方 便食品（主食类：方便米粉、方便粥、方便米粉、方便米线、方便粉丝、方便湿米粉、方 便豆花、方便湿面、凉粉 ，其他：冲调类：麦片、黑芝麻糊、红枣羹、油茶、即食谷物 粉、其他） 。 4 原理 试样在碱性溶液体系提取离心后，经阴离子交换柱净化，采用氨水 -甲醇（25+75，体 积比）洗脱，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，外标法定量。 5 试剂和材料 5.1 材料 全国团体标准信息平台 5.1.1 水为 GB/T 6682 规定的一级水。 5.1.2 50 mL塑料离心管。 5.1.3 0.22 μm亲水相滤膜。 5.1.4 10 mL玻璃试管。 5.1.5 注射器。 5.1.6 固相萃取柱：离子交换型固相萃取柱，参考型号： Cleanert PW AX 150 mg/6mL ， Strata -X-AW 33 μm Polymeric Weak Anion 60 mg/3mL 。 5.1.7 100 μL、200 μL、500 μL、1 mL和5 mL移液枪。 5.1.8 5 mL的棕色容量瓶（带螺旋盖） 。 5.1.9 0.45 μm水相微孔滤膜和 0.45 μm有机相微孔滤膜。 5.2 试剂 5.2.1 甲醇 (CH 3OH)：色谱纯。 5.2.2 氨水 (NH 3•H2O)：优级纯，含量 25.0%～28.0%。 5.2.3 碳酸氢钠 (NaHCO 3)：优级纯。 5.2.4 乙酸铵(CH 3COONH 4) ：优级纯。 5.2.5 甲酸 ( HCOOH) ：优级纯。 5.3 试剂配制 5.3.1 乙酸铵溶液（ 0.02 mol/L ）:称取1.54 g乙酸铵,加水至 1000 mL ,溶解，经 0.45 μm 水相微孔滤膜过滤后使用。 5.3.2 氨水-甲醇溶液（ 25+75，体积比） ：准确量取 25 mL氨水，甲醇 75 mL，混匀。 5.3.3 甲酸-水溶液（ 2+98，体积比） : 准确量取 2 mL甲酸，水 98 mL，混匀。 5.3.4 甲醇-水溶液（ 4+6，体积比） ：准确量取 40 mL甲醇，水 60 mL，混匀，作为提取 液。 5.4 标准品 5.4.1 柠檬黄（CAS: 1934 -21-0）。 5.4.2 苋菜红（CAS: 915 -67-3）。 5.4.3 新胭脂红 （CAS: 2611 -82-7）。 5.4.4 日落黄（CAS: 2783 -94-0）。 5.4.5 诱惑红（CAS: 25956 -17-6）。 5.4.6 亮蓝（CAS: 3844 -45-9）。 全国团体标准信息平台 5.4.7 胭脂红（CAS: 15876 -47-8）。 5.5 标准溶液配制 5.5.1 合成着色剂标准贮备液（ 0.5 mg/L ）:购买经国家认证并授予标准物质证书的标准物 质。 5.5.2 合成着色剂标准使用液（ 10 μg/mL ）:临用时将标准贮备液加水稀释 50倍，经 0.45 μm水相微孔滤膜过滤。配成每毫升相当 10.0 μg的合成着色剂。 6 仪器和设备 6.1 高效液相色谱仪：带二极管阵列或紫外检测器。 6.2 涡旋混合器。 6.3 分析天平：感量 0.01 g。 6.4 离心机：转速不得低于 4000 r/min 。 6.5 氮吹仪。 6.6 高速粉碎机。 6.7 筛网： 1 mm～2 mm试验筛孔径。 6.8 固相萃取装置（带真空泵） 。 6.9 匀浆机。 7 分析步骤 7.1 样品制备 7.1.1 干基样品：采样量大于 1 kg，用高速粉碎机将其粉碎，过筛，使其粒径小于 2 mm 孔径试验筛，混合均匀后缩分至 100 g，储存于样品瓶中，密封保存，供检测用。 7.1.2 湿基样品：取 50 g（精确至 0.01 g）样品，用刀切成碎块，粘稠状固体可以采用匀 浆机研磨或直接切碎，混匀，作为试样；其他湿基食物可以采用冷冻法或 105 ℃烘箱法烘 干，置高速粉碎机粉碎，混匀，作为试样。 7.2 样品提取 准确称取 5 g（精确至 0.01 g）样品于 50 mL塑料离心管中，准确添加 0.8 g（精确至 0.01g）优级纯碳酸氢钠作为辅助提取剂，加入 20 mL甲醇-水溶液（ 4+6，体积比） ，涡旋 混合提取 5 min，在 4000 r/min 条件下常温离心 5分钟，取上层清液于另一离心管中，残留 物用 20 mL甲醇-水溶液（ 4+6，体积比）重复提取 2次，合并提取液备用。 7.3 样品净化 固相萃取柱的活化参照厂家提供的说明，离子型交换固相萃取柱净化工艺参考条件： 全国团体标准信息平台 1）活化：用 3～6 mL甲醇、 6 mL水活化，用 3 mL 甲酸 -水溶液（ 2+98）平衡，弃去 滤液； 2）上样：准确移取 1 mL待测样品上清液加入固相萃取柱，弃去滤液； 3）淋洗：用 3～5 mL 甲酸 -水溶液（ 2+98）淋洗固相萃取柱，弃去滤液，将小柱抽 干； 4）洗脱：准确移取 1 mL氨水 -甲醇溶液（ 25+75）洗脱固相萃取柱，收集洗脱液； 5）氮吹：在 50 ℃条件下，将收集的洗脱液加热并采用氮吹方式吹干； 6）复容：准确移取 1mL的纯水复容，涡旋混合 1 min，待样品充分溶解，将样品溶液 过0.22 μm亲水滤膜过滤，待上机分析。 7.4 仪器参考条件 根据所用仪器型号将仪器调至最佳状态 ｡仪器测定参考条件如下： 7.4.1 色谱柱: C18柱（柱长 250 mm，柱内径 4.6 mm；填料粒径 5 μm） ，或相当者； 7.4.2 进样量: 10 μL。 7.4.3 柱温: 35 ℃。 7.4.4 二极管阵列检测器波长范围 :400 nm～800 nm（参考条件：柠檬黄： 427 nm； 苋菜红： 520 nm；胭脂红： 508 nm；日落黄 482 nm；诱惑红： 507 nm；亮蓝 624 nm） ；或 紫外检测器检测波长 :254 nm。 7.4.5 流速 1.0 mL/min。梯度洗脱见表 1。 表1梯度洗脱表